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熒光分光光度法在海洋生物體中石油烴含量測(cè)定上的應(yīng)用

日期: 2024-11-01
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摘要: 熒光分光光度法是對(duì)熒光物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的有效方法。目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于測(cè)定海洋生物體重石油烴含量的方法有著明確的規(guī)定,即GB 17378.6-2007《海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范? 第六部分:生物體分析》——13.石油烴? 熒光分光光度法。此方法屬于仲裁方法。

本文依據(jù)國(guó)家GB 17378.6-2007內(nèi)容,應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計(jì)對(duì)海洋生物體中石油烴含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果證明此方法操作簡(jiǎn)便, 線性良好是測(cè)定海洋生物體中石油烴含量的理想方法。


關(guān)鍵詞: 熒光分光光度法 海洋生物體 石油烴


原理

生物樣品經(jīng)氫氧化鈉皂化, 用二氯甲烷萃取。將萃取液 中的二氯甲烷蒸發(fā)后, 殘留物用石油醚溶解, 于激發(fā)波長(zhǎng) 310nm,發(fā)射波長(zhǎng)360nm處進(jìn)行熒光分光光度測(cè)定。



實(shí)驗(yàn)條件

1、儀器及附件:

天津港東 F-380 型熒光分光光度計(jì)

熒光石英比色皿

2、分析條件:

激發(fā)波長(zhǎng):310nm

發(fā)射波長(zhǎng):360nm

3、藥品:

20#標(biāo)準(zhǔn)油(國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局) 、活性炭(60目)、石 油醚(沸點(diǎn)范圍: 60~90℃) 、無(wú)水乙醇(重蒸餾)、氯化 鈉(飽和溶液) 、氫氧化鈉(優(yōu)級(jí)純)、鹽酸、二氯甲烷 (重蒸餾)等。

4、其它:

分析天平(0.0001g) 、容量瓶、三角瓶、移液管、燒 杯、具塞比色管、擦鏡紙、玻璃層析柱、皂化瓶、錐形分液

漏斗、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等。


?標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品測(cè)定

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備流程圖

熒光分光光度法在海洋生物體中石油烴含量測(cè)定上的應(yīng)用

(2)具體步驟

① 移? ? ?。悍謩e量取0mL、0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、0.90mL油標(biāo)準(zhǔn)使用液(100μg/mL)于100mL皂化瓶 中;

② 皂? ? 化:向上述皂化瓶中加入20mL氫氧化鈉溶液(6mol/L),室溫下避光皂化8~12小時(shí),然后加入20 mL無(wú)水乙醇溶液(重蒸餾),充分搖勻;

③ 分? ? 液:4小時(shí)后將皂化液轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗中,用10mL二氯甲烷(重蒸餾)洗滌皂化瓶,洗滌液轉(zhuǎn)入分液漏斗中,加30mL氯化鈉溶液和100mL水,振蕩3min后靜置分層;

④ 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā):將有機(jī)相收集與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中,用10mL二氯甲烷溶液再萃取一次,合并有機(jī)相,于50℃水浴中將二氯甲 烷蒸發(fā)至0.5mL;

⑤ 收集待測(cè):取下蒸發(fā)瓶用氮?dú)鈱埩舻挠袡C(jī)溶劑吹干,準(zhǔn)確加入10.0mL脫芳石油醚溶解殘留物。


2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

設(shè)置激發(fā)波長(zhǎng)310nm, 發(fā)射波長(zhǎng)360nm, 分別測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)液的熒光強(qiáng)度, 以相對(duì)熒光強(qiáng)度Ii-空白熒光強(qiáng)度I0為縱坐 標(biāo),石油烴含量(μg/mL)為橫坐標(biāo)建立工作曲線。


3、樣品的制備及測(cè)定

(1)樣品制備流程圖

熒光分光光度法在海洋生物體中石油烴含量測(cè)定上的應(yīng)用



① 樣品前處理:烘干或冷凍干燥(對(duì)類(lèi)脂物含量高的生物樣品);

② 以相同的步驟同時(shí)制備分析空白樣品。


測(cè)定結(jié)果

應(yīng)用F-380型熒光分光光度計(jì)的“光度測(cè)定”模塊建立石油烴的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,并進(jìn)行樣品測(cè)定。


結(jié)論

采用熒光分光光度法測(cè)定海洋生物體中石油烴的含量,操作簡(jiǎn)單,方法準(zhǔn)確,是一種理想的方法。

由于石油烴標(biāo)準(zhǔn)溶液在測(cè)試過(guò)程中需要進(jìn)行樣品的背景扣除, 因此實(shí)驗(yàn)對(duì)儀器的功能要求更高。港東F-380型熒光分光光 度計(jì)率先在軟件上采用了獨(dú)特的雙背景扣除功能,自動(dòng)計(jì)算石油烴的濃度,使整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便,結(jié)果重現(xiàn)性良好。




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Printed in CHINA, September 1, 2011


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